小鼠總(IgG）定量

分析酶聯免疫檢測試劑盒

使用前請仔細閱讀說明書並檢查試劑組分是否完整, 本試劑盒僅供科研使用 。如有產品包裝破損或質量投拆 ，請在收到貨一個月之內聯係尊龍凱時 。

1.IgG簡介

（IgG）主要由脾 、中的合成和分泌 ，以形式存在 。在過程中機體在出生後第3個月開始合成IgG ，3～5歲接近成年人水平 。IgG是中主要的成分 ，約占血清總的75% 。

在免疫應答中起著激活補體 ，中和多種的作用 ，是機體抗感染的主要物質 。

IgG是四鏈單體 ，根據IgG中γ鏈性差異 ，人IgG有4個亞類 ：IgG1 、IgG2 、IgG3和IgG4（小鼠4個亞類是IgG1 、IgG2a 、IgG2b和IgG3） 。不同IgG亞類的活性有所差異 。IgG的半衰期相對較長 ，約為20～30天 。

2.檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測小鼠來源樣本中的總IgG濃度 。IgG捕獲抗體已預包被於酶標板上 ，當加入標本或參考品時 ，其中的IgG會與捕獲抗體結合 ，其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。當加入與HRP耦連的抗IgG抗體後 ，抗小鼠IgG抗體與IgG接合 ，形成夾心的免疫複合物 ，其它遊離的成分通過洗滌的過程被除去 。最後加入顯色劑 ，若樣本中存在IgG將會形成免疫複合物 ，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質 ，在加入終止液後呈黃色 。通過酶標儀檢測 ，讀其450nm處的OD值 ，IgG濃度與OD450值之間呈正比 ，通過參考品繪製標準曲線 ，對照未知樣本中OD值 ，即可算出標本中IgG濃度 。

3.試劑盒組成

3.1 、預包被板12條/6條(96T/48T) ；

3.2 、標準品2瓶/1瓶(96T/48T) ，凍幹 ；  

3.3 、20×標準品稀釋液 ，1瓶10ml/5ml(96T/48T) ；

標準曲線中0濃度標準品以標準品稀釋液直接加入 。

3.4 、即用型抗IgG抗體的HRP酶結合物1瓶 ， 5ml/2.5ml（96T/48T）

3.5 、TMB底物溶液 ，1瓶10ml/5ml（96T/48T） ；

3.6 、中止液 ，1瓶5ml ；

3.7 、濃縮洗滌液（20×） ，1瓶30ml/15ml（96T/48T） ；

3.8 、封板紙3張/2張（96T/48T） ；

3.9 、說明書一份 ；

4.檢測中需要但沒有提供而需要自備的材料 ：

4.1 、振蕩混勻器 。

4.2、可控溫水浴箱  37℃ 。

4.3 、ELISA酶標儀（450nm） 。

4.4 、移液槍頭等         

5．注意事項

5.1 、未開封的試劑應保存在2－8℃ 。

包裝箔袋開封後 ，應立即封緊。開封後的包被微孔板儲存在2－8℃下可以穩定6個星期 。

5.2 、所有試劑和所需的微孔板條在使用前應平衡至室溫 。

5.3 、使用前將濃縮洗滌液用蒸餾水按1 ：20稀釋（例如 ：10ml濃縮洗滌液應用蒸餾水稀釋至終體積200ml） 。

5.4 、稀釋後的洗滌液在2－8℃下可以保存4個星期 。

5.5 、樣本收集

血清和EDTA處理的血漿樣本 。避免使用明顯溶血 、黃疸 、脂血樣本 。使用的血清和EDTA血漿樣本 ，按常規方法製備 。樣品在2－8℃下保存不超過24小時 。如果樣品需要長期存放（3個月以上） ，應凍存在－20℃ 。使用過程中應避免反複凍融 。

6.檢測過程

所有的試劑和樣本在使用前應平衡至室溫並搖勻（搖勻過程應保證無泡沫產生） 。一旦檢測開始 ，應連續操作 ，不中斷 。開始分析前 ，推薦準備好所有試劑 ，打開瓶蓋 ，將所需微孔板條固定等等 ，以防止實驗中出現不必要的時間拖延 。使用每種試劑 、標準品或樣品時 ，都應更換一次性移液槍頭 ，以免交叉汙染 。

7.檢測步驟

7.1 、將所需微孔板條在微孔架上固定 ，按1份標準品稀釋液加19份超純水或去離子水提前稀釋成標準品稀釋液的工作原理 ；

7.2 、移取10μl稀釋好的標準品以及樣本至相應微孔中 ，樣本需稀釋100000倍以上 。

提前稀釋標準品:加入標準品稀釋液100μl至凍幹標準品瓶中使IgG終濃度達到100ng/ml ，請嚴格控製在25～28℃ ，靜置10~15分鍾後輕輕混懸（建議抽吸幾次）待徹底溶解 ，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋後依次加入檢測孔中 。（標準曲線取七個點 ，最高濃度為100ng/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）

7.3 、 每孔加90μl標準品稀釋液 ，25～28℃孵育120分鍾 ；

7.4 、 用洗滌液將微孔洗滌5次（推薦使用洗板機） 。

重要提示 ：

洗滌液加入板孔中 ，需浸泡10秒 ，最後一次必須在幹淨的吸水紙上用力拍打微孔 ，除去殘留洗滌液 。洗滌操作的正確與否將影響整個實驗分析的靈敏度和精密度 。

7.5 、每孔加50μlHRP耦連的抗IgG抗體 ， ，25～28℃孵育60分鍾 ；

7.6、用洗滌液將微孔洗滌5次（推薦使用洗板機） 。

7.7 、每孔加入100ul底物溶液 。室溫避光孵育15分鍾（25－28℃） 。

7.8 、每孔加入50ul終止液 ，終止酶反應 。並在450nm處測定OD值（參考波長600－650nm） 。讀取OD值最好在10分鍾內完成 。

8．結果計算

在方格座標紙上 ，以標準品的濃度作為橫坐標（對數刻度），對應的OD值作為縱坐標（線性刻度） 。利用連接的標準曲線可讀出樣本的OD值對應的濃度值 。試劑濃度需乘以稀釋倍數 。

任何樣品濃度如果高於最高標準品濃度 ，樣品應用標準品稀釋液作適當稀釋後重新測量分析 。所得結果乘以稀釋倍數後即樣品實際濃度 。

9.參考數據及曲線

                  典型參考數據

小鼠IgG參考標準曲線

10．靈敏度 、特異性和重複性

1.靈敏度 ：多次重複結果表明 ，最小檢出量為1.24ng/ml 。

2.特異性 ：本試劑盒采用特異性抗體識別小鼠IgG ，包括IgG1 、IgG2a 、IgG2b和IgG3 ，檢測值為總的IgG濃度 。

3.重複性 ：板內 ，板間變異係數均<10%.