貨號

H087

種屬

人

細胞來源

ATCC/中科院/協和醫院等地引進

生長特性

貼壁  上皮樣

培養條件

培養基 ：DMEM（L）+10%FBS （推薦HAKATA優等胎牛血清 ，貨號:HN-FBS-50）

溫度 ：37℃     氣相 ：95%空氣,5% CO2

傳代

1. 用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒 ，將其平躺置於培養箱中進行1-3小時的緩衝 ，.然後置於無菌操作台 ，打開瓶口 ，將其中的培養液去掉 ，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)並置於細胞培養箱中培養 ，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代 ，一般2到3天換一次液 ；

2.待細胞長至80-90%時 ，需要對其進行傳代 ，推薦傳代比例為1:3至1:5  ；

3傳代步驟 ：將0.25%胰酶-0.53 mM EDA消化液置於37°預熱 ，倒掉培養瓶中的培養基 ，往培養瓶中加入3-5 ml PBS ，輕晃洗滌後棄去 。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶 ，置於37°孵育消化（第一次消化需時常取出置於顯微鏡下觀察 ，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓 、輕拍瓶壁見細胞脫落為最佳消化時間 ，記錄最佳消化時間 ，以便於下次消化） ，消化好後加入3ml完全培養基終止消化 。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞 ，使之完全脫落 ，然後收集細胞懸液 ，1200rpm離心5min ，棄上清 ，加入完全培養基重懸細胞 ，進行傳代 。

保存

凍存條件 ：80%完全培養基+10%FBS+10%DMSO

(備注 ：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100） ，用4度保存的冷凍液直接重懸細胞 ，不能預熱後使用 。)

保存條件：液氮存儲

供應限製

僅供研究之用

常見問題及解決方案

1.培養瓶有破裂 ，培養液有漏液 ：細胞極大可能會汙染 ，所以尊龍凱時會及時安排幫老師解決 。

2.收到細胞後盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基 ，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基 ，請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過 72 小時）

3.細胞漂浮 ：培養瓶不開封 ，瓶口酒精擦拭後平躺放置在培養箱 。1-2小時後觀察 ，如細胞大部分又貼回瓶底 ，表明細胞活力正常 ，剩餘漂浮的細胞可以去掉 ，留8-10ml培養液培養觀察 ，細胞生長至匯合度80% ，進行消化傳代 ；如細胞還是不貼壁 ，將細胞離心收集轉到新培養瓶 ，原培養瓶加部分培養液繼續培養 ，中間注意觀察 ，尊龍凱時的技術人員會一直跟蹤指導 ，直到問題解決 。