（1）單獨衝洗 ，防止交叉反應造成汙染。

臨床上每天檢測的病例很多 ，所用的抗體種類及項目也多 ，如果在加入一抗孵育完後 ，將它們在一個缸內洗 ，這樣就會造成交叉汙染 ，影響最後的結果 。正確的做法是單獨地進行衝洗 ，衝洗的PBS為一次性 ，保證切片沒有相互交叉汙染的機會 。

（2）溫柔衝洗 ，防止切片的脫落 。

衝洗切片 ，取出切片 ，將PBS從上輕輕地衝洗 ，讓PBS自上而下流下來 ，不要拿起切片將PBS對準切片衝洗 ，這樣由於衝出的PBS有一定的衝擊力 ，很容易使切片周邊引起鬆動 ，導致切片的脫落。

（3）衝洗的時間要足夠 ，才能徹底洗去結合的物質 。

衝洗切片有人提出用微振蕩器振染 ，振下未結合的各種物 ，使之不產生背景 ，此種做法一是浪費時間 ，二是很容易導致切片的脫落 。切片的衝洗據實踐認為 ，用一小燒杯柔和地於切片上衝洗 ，就能徹底衝洗去未結合的物質 ，無需附加其它條件 ，衝洗好於切片上再注入PBS ，持續2分鍾左右就完全足夠了。

（4）PBS的PH和離子強度的使用和要求 。

中性及弱鹼性條件（PH7-8）有利於免疫複合物的形成 ，而酸性條件則有利於分解 ；低離子強度有利於免疫複合物的形成 ，而高離子強度則有利於分解 。

（5）常用試劑的配製和使用 。

在免疫組織化學的染色過程中 ，用得最多的試劑就是緩衝液 ，因為切片在整個染色中 ，抗體的加 、換 、切片的衝洗 ，DAB的配製都離不開緩衝液 。可見緩衝液在整個染色中都起至關鍵的作用 ，緩衝液的過酸或偏堿 ，都將影響染色的結果 。