胎牛血清是細胞培養重要的培養基且不可替代 ,它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血 。此時胎牛各髒器正處生長分化階段 ,血中含有豐富的生長發育因子 ,非常適合各種細胞的培養 。
因此 ,如何在使用過程中保護這些因子的活性 ,達到最大的細胞培養效果,就需要正確地使用胎牛血清 。
正確地使用胎牛血清可分為以下四個方麵 :
1. 正確儲存 ,避免反複凍融
1) 血清在-20°C凍存 。
2) 血清避免反複凍融 ,以免降低因子活性 。如一次用不完 ,應進行分裝 。
3) 血清和培養基應盡可能“現用現配” ,配好的培養液 ,應於一周內用完 。
4)血清避免在4°C或更高溫度靜置過久 ,否則會破壞血清中有效活性成分 ,影響血清品質。
2. 正確的融化
國際上流行的【血清融化三步法】可最大限度地保存血清中因子的活性 ,不會產生沉澱 ,同時能縮短血清融化時間 。具體如下 :
3. 關於胎牛血清的滅活
真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體 ,如果針對補體滅活的話 ,就不需要 。其他情況根據實驗設計來決定 。
4. 胎牛血清的濃度
胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養基中 ,混合後配成完全培養基 。
曾有文獻報道 ,不同胎牛血清濃度對細胞存在一定的影響 ,尤其是幹細胞和原代細胞 。具體最佳濃度需要用戶根據自己的實驗來確定 ,以既保證培養的效果 ,又避免血清的浪費 。