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胎牛血清的這些指標你都知道嗎 ?

牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基 ,含有豐富的細胞生長必須的營養成份 ,常用於動物細胞的體外培養 ,具有極為重要的功能 。
1.提供對維持細胞指數生長的激素 ,基礎培養基中沒有或量很少的營養物 ,以及主要的低分子營養物 。
2. 提供結合蛋白 ,能識別維生素 、脂類 、金屬和其他激素等 ,能結合或調變它們所結合的物質活力 。
3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合 ,起到解毒作用 。
4.是細胞貼壁 、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源 。
5.起酸堿度緩衝液作用 。
6.提供蛋白酶抑製劑 ,使在細胞傳代時使剩餘胰蛋白酶失活 ,保護細胞不受傷害 。


胎牛血清都有哪些重要的指標


一 、內毒素
內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的特有成分 。當細菌死亡自溶或粘附在其它細胞時 ,才表現其毒性 。內毒素直接參與細胞凋亡 ,血清中內毒素含量越低 ,對細胞毒性越小 ,越利於細胞的生長和傳代 ;內毒素含量過高 ,會直接導致細胞提前老化 。國際上規定 ,胎牛血清的級別 ,應以內毒素水平的高低來確定 ,其中 ,特級胎牛血清的內毒素應<10EU/ml

二 、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會根據血紅蛋白含量的不同表現出黃色 、淡黃色 、橘紅色 、微紅色等 。細胞培養用血清的標準是血紅蛋白含量不高於20mg/dl ,顏色越紅 ,數值越高 ;反之 ,數值越低 。實際上 ,血紅蛋白含量的高低對血清並無直接影響 。這個指標的意義在於能體現出采血過程的嚴謹規範程度 ,良好的操作能降低血清的溶血 。

三 、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般範圍是30-40mg/ml ,數值偏高 ,說明采血的牛齡偏大 ,不是胎牛 ;數值偏低 ,表明血清可能摻水了 。

四 、pH值
根據藥典 ,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間 ,並沒有什麽具體依據把進口血清和國產血清用7.5這個分界線界定 。

五 、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點法 ,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg) :280-360之間

六 、微生物
包括細菌 、黴菌 、支原體 、噬菌體等 。隨著各個品牌血清生產條件的改善提高 ,細菌 、黴菌等“大型”微生物幾乎能100%控製 。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除 。如CellMax胎牛血清 ,3次0.1um無菌過濾以後 ,又通過培養法和DNA染色法進行支原體檢測 ,結果均呈現陰性才會放行銷售 。關於噬菌體主要是生產環境過程中帶入 ,又無法過濾 ,很難徹底清除 ,但對血清質量影響不大 ,不過對於工業生產的客戶來說 ,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體 。

七 、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數值能完全體現出采血時的牛齡情況 ,新生牛血清容易產生IgM ,IgG的含量也偏高 ;胎牛血清不含IgM ,IgG的含量也較低 。可以通過血清蛋白電泳SDS檢測 。
低IgG的胎牛血清推薦適用於抗體生產及相關領域 。

有下列情況者 ,對血清內毒素應格外留意篩選:
1.養幹細胞時 ,幹細胞對內毒素非常敏感 ,如果血清中內毒素≥3EU/ml時 ,幹細胞很容易死亡 。很多使用者 ,在血清在試用前 ,就通過提早審核該批次《檢測報告》 ,以決定是否入圍進行試用 。
2.養免疫細胞時 ,過高的內毒素可誘導免疫細胞釋放炎症因子 ,抑製小鼠紅細胞集落的形成等 。
3.基因敲除相關的細胞實驗 ,培養的細胞要盡可能保持其原始狀態 ,任何引導細胞衰老或凋亡的試劑 ,都會讓後續的實驗結果“失之毫厘 ,謬以千裏” 。在準備血清和其他試劑時 ,選擇極低的內毒素(最好≤1EU/ml) ,對實驗至關重要 ;
4.原代培養 、雜交瘤融合 、細胞轉染 ,或者肝細胞 、神經細胞 、內皮等難養細胞的擴增 ,這些都需要挑選好的血清給細胞以有力支持 。因此 ,挑選更低的內毒素 ,是保證實驗順利的第一步 。
5.實驗室有些細胞 ,需要長期培養 、長期凍存 ,或者經常複蘇 、經常培養的 ,血清會經常或長時間作用於細胞 。為保證細胞的健康 ,都應該選用更低內毒素的血清 ,以避免內毒素長久對細胞的毒性影響 。
總之 ,血清中內毒素含量過高 ,更容易導致細胞“亞健康” ,造成數據不準 ,或細胞狀態不良 、老化 、甚至死亡 ,導致試驗中斷失敗 。血清中的內毒素越低越好 。
全球細胞培養學會均依據內毒素對血清的品質進行分級和命名 。
內毒素含量越低的血清 ,級別就越高 ,以胎牛血清為例 :
當血清中內毒素含量≤10EU/ml時 ,此血清為特級胎牛血清 ;
當血清中內毒素含量﹥10EU/ml ,≤ 25EU/ml時 ,此血清為優級胎牛血清 ;
當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時 ,此血清為標準級胎牛血清 ;


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