細胞的複蘇

細胞複蘇的原則－快速融化 ：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃ ，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化 ，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶 ，對細胞造成損害 。

具體操作

一.  實驗前準備 ：

1.將水浴鍋預熱至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超淨工作台台麵 。

   3.在超淨工作台中按次序擺放好消過毒的離心管 、吸管 、培養瓶等等 。 

二．取出凍存管 ：

   1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號 。

   2.從液氮罐中取出細胞盒 ，取出所需的細胞 ，同時核對管外的編號 。

三．迅速解凍 ：

   1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍 ，並要不斷的搖動 ，使管中的液體迅速融化 。

   2.約1-2min後凍存管內液體完全溶解 ，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁 ，再拿入超淨台內 。

四.平衡離心 ：

    用架盤天平平衡後 ，放入離心機中3000r/min 離心3min

五.製備細胞懸液 ：

    1.吸棄上清液 。

    2.向離心管內加入10ml培養液 ，吹打製成細胞懸液 。

六.細胞計數 ：

   細胞濃度以5×10⁵/ml為宜 。

七.培養細胞

   將複合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內 ，將培養瓶放入37℃和5％CO₂的培養箱內2-4小時（或者24-48小時）後換液繼續培養培養 ，換液的時間由細胞情況而定 。

初學者易犯錯誤 ：

1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃ 。

2.水浴鍋內凍存管太多 ，導致傳熱不佳 ，使融化時間延長 。

3.離心前忘記平衡 ，導致離心機損壞和細胞丟失 。

4.一次複蘇細胞過多 ，忘記更換吸頭和吸管 ，導致細胞交叉汙染 。