Q:在做3T3L1前脂肪細胞分化過程中 ,當加了IBMX(0.5mM)+胰島素(10ug/ml)+地塞米鬆(0.25uM/L)後 ,細胞分化的比較好 ,
在加分化液後的第4天就開始出現脂滴 ,在第8天後有90%以上的細胞中出現明顯的脂滴 ,
但是從加分化液後的第2天起 ,培養液中就開始出現大量的懸浮細胞 ,每次換液時這些懸浮的細胞就丟失了 ,
到第8天後培養瓶中貼壁的細胞很少啦 ,如何才能避免這些細胞的懸浮啊 !是所加分化液濃度問題(如胰島素濃度)還是其它原因啊 ?
A:細胞的來源一定要好 。3T3L1細胞株容易蛻化 ,一旦發現細胞的形態不好一定要換新的細胞株 ,
最好一年從atcc購買至少一次 ,細胞的好壞是決定後麵 ,分化 、漂浮等等一切的關鍵 ,本人的細胞都是從atcc購買 。
1 :8傳代後三天即可長到80%以再次傳代 ,傳代後4天細胞可以融合 ,再讓其融合兩天後即可以分化 ,時間過久細胞會漂浮或層疊
,不利於分化 ;沒有融合的過程 ,細胞沒有退出快速生長期也不利於分化 ;分化之前可以將細胞用hank‘s液輕輕洗一下 ,洗去漂浮的細胞 ,
然後再加分化液 ;已經開始分化的細胞每次換液時候小心 ,不要去振蕩或搖晃瓶子 ,可以將瓶子豎立起來 ,將培養液加在瓶子上沒有貼細胞的一麵,
這樣不會將細胞吹打起來 ;細胞分化過程中換液要及時 ,按兩天一次換液 ,分化後第8天有90%以上的細胞中有脂滴 ,要及時使用 ,
不然時間稍長分化好的細胞就漂浮起來啦!再想讓它貼壁就困難啦 !