如何進行流式細胞術 ？

Q:我用AAV病毒感染293tt細胞以檢查我的CAR分子的表達 。根據方案 ，我將收集細胞並在PBS中洗滌 ，而不是用抗體（Fab片段抗體）染色用於流式細胞術 。我想存儲我的細胞 ，並希望在幾天後運行FACS 。

我研究了一些方法 ，他們說我需要用PBS修複它 ，當我使用時 ，我需要用抗體染色 。然而 ，在某處 ，我讀到需要用PBS清洗 ，用抗體染色30分鍾 ，然後用PBS清洗儲存 。

所以哪個是更好的選擇 ，我可以用PBS清洗並存放 。或者我還需要用Ab染色它而不是儲存它 ？如果我需要用抗體染色 ，我可以用它染30分鍾 ，或者我需要用抗體染色直到我用它 ？

A ：我通常在染色後將細胞固定用於流式細胞術 。然後我攪拌樣品的最長時間是40天 ，這對我的結果沒有影響 。這是協議 。

1.用2％FCS洗滌pbs中的染色細胞 。

2.在pbs溶液中加入3％pfa（多聚甲醛） ，在室溫下孵育30分鍾 。

3.孵育後用pbs洗滌細胞並加入pbs並將其儲存在冰箱中 。

您需要確保樣品在密封的小瓶或parrafilm蓋板中長期儲存 ，以防止幹燥 。

或者 ，我也嚐試將1％pfa中的染色和洗滌的細胞重新懸浮於pbs中並儲存直至使用而無需任何洗滌步驟 。