材料 ：

磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）

胰蛋白酶/ EDTA溶液

組織培養基

細胞凍存液（通常為10％二甲基亞碸 ，DMSO）

帶標簽的冷凍管（每100毫米板約3個）

100毫米的融合細胞板

凍結程序 ：

預凍存

1）在顯微鏡下檢查細菌 ，酵母或真菌汙染 。

2）測試支原體樣品 。

凍存

3）胰蛋白酶消化細胞（標準方案） 。

4）將細胞重懸於培養基中 ，轉移至無菌離心管中 ，以1000RPM和4℃離心3-5分鍾 。

5）用無菌巴斯德吸管移除上清液 。

6）通過每瓶加入1ml細胞凍存液快速重懸顆粒以冷凍 。

7）每瓶1ml細胞凍存液加細胞 ，置於冰上 。

8）在-80℃下冷凍過夜 。

9）將小瓶轉移到液氮罐中以無限期儲存 。

後凍結

10）從液氮罐中取出小瓶 ，並按照下麵的解凍程序測試冷凍是否成功 。

複蘇程序 ：

1）溫熱的組織培養基 ，不選擇抗生素至37℃ ，並標記100-mm組織培養板 。

2）從液氮罐中取出小瓶並在37℃水浴中保持 ，直至兩側解凍但中心仍然冷凍 。

3）輕輕地將細胞倒入板中 。不要搖動小瓶 。

4）向部分冷凍的細胞中滴加9ml溫熱的培養基。

5）將板放入培養箱中 。

6）細胞附著後立即更換培養基（去除DMSO ） 。