THP-1細胞在冷凍和複蘇後表現得很奇怪 ？

我想在冷凍原料瓶後對THP-1細胞有一些建議 。我正在完美地培養這些細胞 。我使用不含抗生素的ATCC推薦培養基 ，以200,000細胞/ ml的速度種植它們兩到三天 ，並以800,000細胞/ ml通過它們 。我確實超過了這個數字 ，但是當我將它們重新接種到200,000個細胞時 ，它們仍然會像以前那樣生長 。所以在這一點上一切都很順利 。

我擴增了細胞 ，直到我有足夠的大約20個小瓶的細胞冷凍 ，每瓶8.5到950萬個細胞（如ATCC建議的那樣） 。我用血細胞計數器測量了細胞數 ，所以我不確定這個數字是否正確 。但是細胞在含有5％DMSO的完全培養基中緩慢冷凍 。

在我凍結細胞後 ，我讀到DMSO可以將細胞分化為巨噬細胞樣細胞 ，應該避免 。我還讀到 ，隻是凍融這些細胞有時可以啟動分化 。無論如何 ，我現在解凍了兩個小瓶 ，我注意到它們不再像以前那樣表現 。

他們不再像以前那樣快速增長 。

2.少數細胞聚集在一起 。

3少數細胞已分化並附著在燒瓶表麵 。

我想我可能隻是注意到這些行為 ，因為我過度焦慮並尋找它們; 他們可能在那之前 ，但我沒有看到他們。

因此 ，如果有人在凍融後THP-1細胞表現出不同的問題那麽請 ，任何建議都會非常感激嗎 ？

您沒有提到解凍後的初始細胞濃度或當前細胞數/活力 。我不確定你是如何解凍它們的 ，但這就是我的實驗室如何解凍THP-1和其他易於與DMSO區分的細胞類型 。

對於一小瓶細胞 ，尊龍凱時在水浴中快速解凍它們 ，並在右上方T-25燒瓶中將1ml細胞加入25-30ml培養基中 。將細胞以直立位置（加蓋）置於培養箱中3-4小時 。這將使細胞沉降到燒瓶底部 。幾小時後 ，小心地從培養箱中取出燒瓶 ，取出約20ml“舊”培養基 ，並用5-10ml新鮮培養基替換 。然後將燒瓶以直立位置返回培養箱數天 。

首先 ，該方法允許以細胞友好的方式還原和去除DMSO 。其次 ，通過在直立式燒瓶中培養細胞數天 ，使細胞保持緊密接觸並改善自分泌和旁分泌信號 ，從而改善細胞活力和生長 。幾天之後 ，他們應該準備好去 ，並且可以以正常方式處理 。

建議使用HAKATA無血清細胞凍存液 ，細胞重懸後直接放入-80°C冰箱過夜 。