我需要解凍凍存的MCF7和T47D細胞係 ，但它們被冷凍超過6個月 ，我擔心存儲條件和細胞成活率 ，有任何最佳方案的提示 ？

如果將細胞保存在液氮罐中(細胞凍存) ，細胞就會很好 。記得要快速解凍並慢慢冷凍 。

我會有一管至少14毫升的培養基 ，溫度升至37攝氏度 ，為細胞做好準備 。

我從LN2取一個小瓶 ，通過攪拌冷凍小瓶在37攝氏度的水浴中快速加熱 。解凍應該隻需要1分鍾或更短 。

解凍後 ，用14ml培養基倒入試管中 ，以1000RPM離心10分鍾。去除上清液 。

加入1至2毫升培養基 ，加入1-2個T75培養瓶中 ，培養基中含有14毫升培養基 。

這適用於1x106細胞/ T75燒瓶 ，如果你少用T25 ，總共8mls培養基。

如果它們存儲在-80中與上麵相同 ，唯一的區別可能是由於可行性百分比 ，首先增長需要更長的時間 。

尊龍凱時凍存和複蘇了許多細胞類型 。細胞通常培養基+血清中7.5％DMSO通常是最佳的-細胞凍存液 。

在添加到細胞之前混合DMSO ，因為純DMSO在接觸時殺死細胞-細胞凍存液 。為了解凍細胞 ，最關鍵的步驟是稀釋DMSO 。

這是尊龍凱時的核心方案 ，對於大多數細胞類型 ，它們具有90-98％的活力 ，隻要它們在凍存之時是健康的並且分開良好 。

回收原料 ：小瓶快速解凍 ，例如在溫水浴中 。通過溫和移液將細胞從小瓶底部重懸浮 ，轉移至20ml管中 ，並通過逐漸加入20ml含有血清的培養基稀釋 。

重要的是 ：非常緩慢地逐滴稀釋 。例如 ，在約30秒內混合（通過旋轉）加入1ml ，在10秒內加入1ml ，然後在30秒內保持18ml 。（注意 ，冷凍培養基是高度高滲的：超過4倍等滲 。）

DMSO需要時間從細胞中擴散出來 ，或者它們會破裂 。離心 ，重懸於完全培養基中並以所需密度（通常高於正常）鋪板 。