胎牛血清白蛋白(BSA)
,又稱第五組分
,是牛血清中的一種白蛋白
,包含583個氨基酸殘基
,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7
。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用
,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應緩衝液中加入BSA
,通過提高溶液中蛋白質的濃度
,對酶起保護作用
。防止酶的分解和非特異性吸附
,能減輕有些酶的變性
,能減輕有些不利環境因素如加熱
,表麵張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白
,一般獲取胎牛血清白蛋白
,常常運用的方法是加熱法
。
下麵一起來看看是怎樣獲取胎牛血清白蛋白的
!
一
、所需材料
胎牛血清以檸檬酸三鈉為抗凝劑
,血液搜集後隨即分別出血漿備用
。需要的試劑有血清白蛋白
;溴jia酚氯
;醋酸纖維素薄膜
,別的試劑均為分析純
。獲取胎牛血清白蛋白需要準備 LG-6型大容量冷凍離心機,DF-C型電泳儀
,UV-754型紫外可見分光光度計,PHS-2型酸度計
。
二
、具體方法
白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法
,以胎牛血清白蛋白為規範. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法
。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質溶液在波長為403 nm處的光吸收值
,然後折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值
,用A403表明
。
胎牛血清白蛋白的生產工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿
,加一定量的蒸餾水稀釋
,再參與恰當的穩定劑和蛋白沉澱劑
,然後按下述方法進行試驗處理
:
1.不一樣pH值溶液對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件固定的情況下
,試驗不一樣pH值對白蛋白的收率
、純度及A403值的影響
。
2.不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下
,試驗不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率
、純度及A403值的影響
。
3.不一樣稀釋倍數對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下
,試驗不一樣稀釋倍數對白蛋白的收率
、純度及A403值的影響
。
4.不一樣加熱溫度對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件選定的情況下
,試驗不一樣加熱溫度對白蛋白的收率
、純度及A403值的影響
。