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如何正確提取胎牛血清白蛋白 ?

胎牛血清白蛋白(BSA) ,又稱第五組分 ,是牛血清中的一種白蛋白 ,包含583個氨基酸殘基 ,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7 。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用 ,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應緩衝液中加入BSA ,通過提高溶液中蛋白質的濃度 ,對酶起保護作用 。防止酶的分解和非特異性吸附 ,能減輕有些酶的變性 ,能減輕有些不利環境因素如加熱 ,表麵張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白 ,一般獲取胎牛血清白蛋白 ,常常運用的方法是加熱法 。
下麵一起來看看是怎樣獲取胎牛血清白蛋白的 !

一 、所需材料

胎牛血清以檸檬酸三鈉為抗凝劑 ,血液搜集後隨即分別出血漿備用 。需要的試劑有血清白蛋白 ;溴jia酚氯 ;醋酸纖維素薄膜 ,別的試劑均為分析純 。獲取胎牛血清白蛋白需要準備 LG-6型大容量冷凍離心機,DF-C型電泳儀 ,UV-754型紫外可見分光光度計,PHS-2型酸度計 。

二 、具體方法

白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法 ,以胎牛血清白蛋白為規範. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法 。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質溶液在波長為403 nm處的光吸收值 ,然後折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值 ,用A403表明 。

胎牛血清白蛋白的生產工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿 ,加一定量的蒸餾水稀釋 ,再參與恰當的穩定劑和蛋白沉澱劑 ,然後按下述方法進行試驗處理 :

1.不一樣pH值溶液對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件固定的情況下 ,試驗不一樣pH值對白蛋白的收率 、純度及A403值的影響 。

2.不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下 ,試驗不一樣加熱保溫時間對白蛋白的收率 、純度及A403值的影響 。

3.不一樣稀釋倍數對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下 ,試驗不一樣稀釋倍數對白蛋白的收率 、純度及A403值的影響 。

4.不一樣加熱溫度對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件選定的情況下 ,試驗不一樣加熱溫度對白蛋白的收率 、純度及A403值的影響 。

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