就一個實驗室而言無論運作的多麽好 ,總會因為革新技術或拓展方向二影響原來的流程 ,從而產生各種各樣的問題 。有些地方錯誤的操作有可能帶來嚴重的後果 ,那麽今天主要列舉細胞生長緩慢的兩大原因 。
一
、培養體係出現問題
1.檢查你所培養的細胞是否存在汙染
。
(1)如果培養細胞未添加抗生素
,細胞汙染則是不可避免的
。
① 用肉眼和顯微鏡進行檢查
。
② 如果細胞被汙染則要棄掉
。
(2)由於支原體汙染不容易覺察到,因此必須定期檢測
。
(3)檢測可能汙染的途徑和原因
。
2.檢查你用於培養細胞的培養基和血清(例如
:是否批次不同或廠商不同)
。如果你常規使用的是粉劑或10×儲存液
,而現在購買的培養基更換為1×液體
,而隨後證明問題就出自於此
。
3.如果問題與培養基無關
,那麽很可能還是細胞的問題
。
(1)複蘇另一支凍存的細胞,並且與正在培養的細胞加以比較
。兩種細胞的培養應分開
,以免在培養之初就產生汙染
。隨後按(2)~(4)步的方法做排查:
(2)對傳代培養的細胞進行計數
,並繪製生長曲線
,與以前培養該細胞的資料進行比較
,檢查是否有下列改變:
① 傳代時是否接種密度過低
。
② 細胞傳代是否過於頻繁
。
③ 傳代前細胞平台期是否過長
。
(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號
,檢查批號和供貨商
。
(4)是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞
,應檢測:
① 胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長
。
② 消化液的濃度和活性是否過高
、過強
。
③ 胰蛋白酶消化時
,孵箱溫度是否過高
。
④ 吹打消化細胞時是否過於用力
。
⑤ 細胞是否對 EDTA過於敏感(如果添加了EDTA)
。
⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤
。
⑦ 是否使用了一批劣質的胰蛋白酶消化液
。
二
、檢查共用的設備和試劑
溫室和孵箱溫度
(1)溫度和溫度設定不準。
① 自動調溫器損壞
。
② 開關孵箱門過於頻繁
。
③ 孵箱門未關緊
。
④ 風扇損壞造成散熱不均
。
(2)孵箱濕度不能維持
① 水盤中未加水
。
② 孵箱有滲漏
。
③ 開關孵箱門過於頻繁
。
④ 在Petri培養皿中放置一定量的PBSA
,每日稱重
,以檢查蒸發率
。
(3)孵箱的CO2濃度不準
① 開關孵箱門過於頻繁
。
② CO2控製器出現問題
。