胰酶使用注意
:
1
、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌汙染
。
2
、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長
,否則細胞鋪板後生長狀況會較差
。
胰酶配製方法
:
1
、培養液配製
,方便好用
,對細胞影響小
,並且培養液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2
、生理鹽水配製
,要先調ph值7.2到7.4(①胰酶(1
:250) 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時
,調pH 7.8-8.0
,過濾除菌
。)
3
、pbs(0.1%胰酶溶液的配製
:稱取胰酶粉末0.1g
,先用少許滅菌過的PBS調成糊狀
,然後補足到100ml
。置室溫攪拌4小時或冰箱內過夜
,過濾滅菌
,分裝
,4℃保存備用
。); 或是hanks或是D-hanks液配製(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中
,先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調成糊狀
,然後再補足D-Hanks 平衡鹽溶液
,攪拌混勻
,置室溫4 小時或冰箱過夜
,並不斷攪拌振蕩;2.次日
,先用濾紙粗濾
,再進行過濾除菌,分裝入瓶中
,低溫冰箱保存備用
,常用濃度為0.25% 或0.125%
。胰蛋白酶溶液偏酸
,使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH 至7.2 左右
。)
一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌
,至於作用效果
,需要消化一次細胞感覺一下
,因為不同廠家的酶不一樣
,有的作用溫和
,有的作用劇烈
。
4
、是否需要四度放置過夜
,取決於你的胰酶的純度
。過去的胰酶純度不高
,所以難以溶解
,需要四度過夜. 而現在的胰酶純度都很高
,就沒有必要四度過夜
。從理論上來說
,四度放置過夜
,給細菌生長的機會
,盡管過濾可以出去細菌
,可是出不掉其代謝產物
。
胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因
,考慮有
:
1
、過期或是酶已經部分變性
2
、溶液ph值不對
3
、在沒過濾之前的絮狀沉澱是正常現象
,因胰酶多取自動物胰腺
,沉澱為組織塊
,過濾後即可
。