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胰酶的使用注意事項及配製方法

胰酶使用注意 :

1 、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌汙染 。

2 、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長 ,否則細胞鋪板後生長狀況會較差 。

胰酶配製方法 :

1 、培養液配製 ,方便好用 ,對細胞影響小 ,並且培養液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解

2 、生理鹽水配製 ,要先調ph值7.2到7.4(①胰酶(1 :250) 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時 ,調pH 7.8-8.0 ,過濾除菌 。)

3 、pbs(0.1%胰酶溶液的配製 :稱取胰酶粉末0.1g ,先用少許滅菌過的PBS調成糊狀 ,然後補足到100ml 。置室溫攪拌4小時或冰箱內過夜 ,過濾滅菌 ,分裝 ,4℃保存備用 。); 或是hanks或是D-hanks液配製(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中 ,先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調成糊狀 ,然後再補足D-Hanks 平衡鹽溶液 ,攪拌混勻 ,置室溫4 小時或冰箱過夜 ,並不斷攪拌振蕩;2.次日 ,先用濾紙粗濾 ,再進行過濾除菌,分裝入瓶中 ,低溫冰箱保存備用 ,常用濃度為0.25% 或0.125% 。胰蛋白酶溶液偏酸 ,使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH 至7.2 左右 。)

一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌 ,至於作用效果 ,需要消化一次細胞感覺一下 ,因為不同廠家的酶不一樣 ,有的作用溫和 ,有的作用劇烈 。

4 、是否需要四度放置過夜 ,取決於你的胰酶的純度 。過去的胰酶純度不高 ,所以難以溶解 ,需要四度過夜. 而現在的胰酶純度都很高 ,就沒有必要四度過夜 。從理論上來說 ,四度放置過夜 ,給細菌生長的機會 ,盡管過濾可以出去細菌 ,可是出不掉其代謝產物 。

胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因 ,考慮有 :

1 、過期或是酶已經部分變性

2 、溶液ph值不對

3 、在沒過濾之前的絮狀沉澱是正常現象 ,因胰酶多取自動物胰腺 ,沉澱為組織塊 ,過濾後即可 。

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