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細胞生長緩慢有哪些影響因素 ?

細胞生長緩慢是實驗人員在培養細胞時常遇見的問題 ,那麽究竟是哪些因素影響 ?又如何改善呢 ?


一.個別人的培養體係出現問題


1.檢查你所培養的細胞是否存在汙染 。


(a)如果培養細胞未添加抗生素(必須添加!),細胞汙染則是不可避免的 。
1)用肉眼和顯微鏡進行檢查
2)如果細胞被汙染則要棄掉 。


(b)由於支原體汙染不容易覺察到 ,因此必須定期檢測

 

(c)檢測可能汙染的途徑和原因

 

2.檢查你用於培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同) 。如果你常規使用的是粉劑或10X儲存液 ,而現在購買的培養基更換為1X液體 ,而隨後證明問題就出自於此 ,處理方法請參見下則分享內容 。


3.如果問題與培養基無關 ,那麽很可能還是細胞的問題 。


(a)複蘇另一支凍存的細胞 ,並且與正在培養的細胞加以比較 。兩種細胞的培養應分開 ,以免在培養之初就產生汙染 。隨後按(b)~ (d)步的方法做排查 。


(b)對傳代培養的細胞進行計數 ,並繪製生長曲線與以前培養該細胞的資料進行比較 ,檢查是否有下列改變:
1)傳代時是否接種密度過低 。

2)細胞傳代是否過於頻繁 。

3)傳代前細胞平台期是否過長 。


(c)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號?檢查批號和供應商 。


(d)是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞?應檢測:

1)胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時間是否過長 。
2)消化液的濃度和活性是否過高 、過強 。

3)胰蛋白酶消化時、孵箱溫度是否過高 。
4)吹打消化細胞時是否過於用力 。
5)細胞是否對EDTA過於敏感(如果添加了EDTA) ,
6)胰蛋白酶稀釋是否有誤 。
7)是否使用了一批劣質的胰蛋白酶消化液 。


二.問題較為普遍 ,其他人也遇到同樣的困難


檢查共用的設備和試劑
溫室和孵箱溫度


1.溫度和溫度設定不準 。
(a)自動調溫器損壞。
(b)開關孵箱門過於頻繁 。
(c)孵箱門未關緊 。
 (d)風扇損壞造成散熱不均 。
用便攜式溫度表重新標定孵箱溫度 。


2.孵箱濕度不能維持
(a)水盤中未加水 ,
(b)孵箱有滲漏 。
(c)開關孵箱門過於頻繁 ,
(d)在Petri培養皿中放置一定量的PBSA,每日稱重 ,以檢查蒸發率 。


3.孵箱的C02濃度不準
(a)開關孵箱門過於頻繁 。
(b)CO2控製器出現問題 。


4.用預先標定的培養基監測箱體內的PH 。


5.用CO2探頭(carborite)檢測孵箱環境 。


6.用標準混合氣重新標定零值和CO2實際值 。


三.實驗室是否發生其他變化?


1.與細胞培養有關的人員是否改變?
(1)培養細胞人員是否發生增減
(2)準備實驗人員是否發生增減
(3)實驗人員的準備過程是否規範
(4)實驗人員是否接受過係統訓練
(5)實驗空間和布局是否過於擁擠


2.細胞培養所需材料是否改變?
(1)供應商

(2)批號

(3)類型

(4)存儲期限

 

3.細胞培養的操作過程是否有變化 ?

(1)孵育時間

(2)操作速度

(3)操作順序

(4)位置

(5)範圍大小

 

4.細胞培養的專業儀器設備是否完好 ?

(1)新近購置 :是否新添儀器設備 ?

(2)運行狀況 :是否設備損壞 ?

(3)擺放位置 :正在使用的儀器是否有足夠的擺放空間 ,是否要移動鄰近的儀器 ?

(4)操作溫度 :儀器是否在正常的溫度範圍內運轉 ,你的樣品是否也需此溫度範圍 ?


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