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原代細胞培養中常見的一些錯誤

原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出後立即培養的細胞 。原代細胞不僅廣泛應用於分子 、細胞生物學和生物醫學基礎研究 ,如蛋白質組學 、基因組學 、細胞株(係)研究 、DNA ,RNA和遺傳學研究等 ,還可應用於當今熱門的生物醫藥產業如藥物篩選 、藥物代謝和毒理研究 、癌症藥物的研究等 。


原代細胞如何進行培養 ?

常用的原代細胞培養有組織塊培養和分散細胞培養 。

分散細胞培養大致步驟為 :將動物組織從機體中取出離散成單個細胞(常用胰蛋白酶) ,置合適的培養基中培養 ,使細胞 得以生存 、生長和繁殖(注意整個過程無菌) 。

組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上 ,加入培養基後進行培養 。


原代細胞培養中的常見錯誤及正確操作方法 ?

錯誤#1 :一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間

糾正#1 :原代細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置於37℃水浴中 ,保持並輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的 。然後應立即從水浴中取出小瓶 ,並轉移到無菌操作台 。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒 ,以便可以立即用於接種細胞 ,並置於培養箱中 。


錯誤#2 :解凍小瓶後直接離心原代細胞

糾正#2 :尊龍凱時不建議在解凍後離心細胞 ,因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害 。記住 ,在恢複原代細胞後的第二天更換培養基以去除任何殘留的DMSO 。


錯誤#3 :允許原代細胞變得過於融合

糾正#3 :當生長至100%匯合時 ,原代細胞可以變得衰老。記住 ,原代細胞不是100%純 ,因此重要的是盡量減少汙染細胞的生長 。尊龍凱時建議在細胞達到90-95%融合時 ,對原代細胞進行傳代培養 。

錯誤#4 :傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正#4 :當細胞傳代時 ,使用低濃度的胰蛋白酶並在顯微鏡下密切監測細胞 。此外 ,記得在胰蛋白酶消化後完全中和細胞中的胰酶 ,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞 。推薦專門為原代細胞配製的胰蛋白酶中和溶液 ,但也可以使用10%血清或大豆胰蛋白酶抑製劑 。


錯誤#5 :原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正#5 :通常尊龍凱時不推薦重新凍存原代細胞 ,因為這可以促進細胞衰老和/或導致功能變化 。原代細胞非常敏感 ,重新凍結可能導致細胞死亡或損傷。


錯誤#6 :原代細胞可以無限的增殖

糾正#6 :與細胞係不同 ,原代細胞具有有限的擴增能力 。尊龍凱時建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移 。此外 ,如果你正在使用一個增值困難的細胞類型 ,你應該密切監測細胞形態 ,因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移 ,大量生長從而成為主要細胞 。


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