一 、 複蘇

1. 把凍存管從液氮中取出來 ，立即投入37℃水浴鍋中 ，輕微搖動 。液體都融化後（大概1-1.5分鍾） ，拿出來噴點酒精放到超淨工作台裏 。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍 ，把粘在壁上的細胞都洗下來） ，1000轉離心5分鍾 。
3. 把上清液倒掉 ，加1ml培養基把細胞懸浮起來 。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中後左右輕輕搖動 ，使培養皿中的細胞均勻分布 。
4. 標好細胞種類和日期 、培養人名字等 ，放到CO2培養箱中培養 ，細胞貼壁後換培養基 。
5. 3天換一次培養基 。

二 、 傳代
1. 培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代 。
2. 把原有培養基吸掉 。
3. 加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鍾 。
4. 細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化 。
5. 用移液槍吹打細胞 ，把細胞都懸浮起來 。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中 ，1000轉離心5分鍾 。
7. 倒掉上清液 ，加1-2ml培養基 ，把細胞都吹起來 。
8. 根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中 。一般 ，癌細胞分5個 ，正常細胞傳3個 。繼續培養 。

三 、 凍存
把細胞消化下來並離心（同上） 。用配好的凍存液把細胞懸浮起來 ，分裝到滅菌的凍存管中 ，靜止幾分鍾 ，寫明細胞種類 ，凍存日期 。4℃ 30min ，-20℃ 30min ，-80℃過夜 ，然後放到液氮灌中保存 。
凍存液的配製 ： 70%的完quan培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加 ，邊滴邊搖 。

要注意的就是無菌操作 ！